光學(xué)顯微鏡簡(jiǎn)介
概述
光學(xué)顯微鏡是用于放大研究樣本的儀器。光學(xué)顯微鏡是一種非常有價(jià)值的分析工具，它有可能使科研人員能夠以原始尺寸的1000倍查看物體。正如您將看到的那樣，光學(xué)顯微鏡通過(guò)一些非常基本的原理進(jìn)行操作，但是在可視化實(shí)驗(yàn)室中的標(biāo)本方面幾乎具有無(wú)限的應(yīng)用。
光學(xué)顯微鏡的基本原理
顧名思義，光學(xué)顯微鏡需要一個(gè)光源，該光源產(chǎn)生的光可以通過(guò)聚光鏡聚焦到樣品上。
照射標(biāo)本的光到達(dá)稱(chēng)為物鏡的透鏡，該透鏡會(huì)產(chǎn)生放大的圖像，該圖像被倒置或上下顛倒。目鏡或目鏡進(jìn)一步放大了眼睛隨后接收到的圖像。可以將其他光學(xué)元件引入光路以校正圖像，以便眼睛以正確的方向看到它。像您在這里看到的那樣使用多個(gè)透鏡的顯微鏡稱(chēng)為復(fù)合顯微鏡。
在復(fù)合顯微鏡中，總放大倍數(shù)是通過(guò)將物鏡的放大倍數(shù)與目鏡或目鏡的放大倍數(shù)相乘得出的。使用40倍物鏡和10倍目鏡，總放大倍數(shù)為400倍。
為了幫助估計(jì)顯微鏡下物體的大小，可以使用目鏡標(biāo)線片（在圖像上投影的標(biāo)尺）。與在較低放大倍數(shù)下觀察時(shí)相比，在較高放大倍數(shù)下，目鏡掩模版中的刻度線將代表較小的距離。
除放大倍率外，顯微鏡光學(xué)的另一個(gè)方面是分辨率。分辨率是指示波器下兩個(gè)對(duì)象之間的zui短可分辨距離。隨著這些字符的頭部越來(lái)越清晰，并且分辨率提高，它們之間的zui短可觀察距離也減小了。
光學(xué)顯微鏡的主要組件
光學(xué)顯微鏡的主要組件包括物鏡，目鏡，樣品臺(tái)和樣品架，光源，視場(chǎng)光闌，聚光鏡和光圈以及粗和細(xì)聚焦旋鈕。
物鏡負(fù)責(zé)顯微鏡的大部分放大和分辨率。它們安裝在旋轉(zhuǎn)的鏡架上，以使隨著物鏡的改變，焦平面保持不變-這種特性稱(chēng)為準(zhǔn)焦。可以用放大倍率，數(shù)值孔徑或NA，所需的浸沒(méi)介質(zhì)類(lèi)型，安裝樣品時(shí)應(yīng)使用的蓋玻片厚度以及工作距離（從透鏡元件的**到透鏡的距離）標(biāo)記物鏡。樣品中的焦平面。
數(shù)值孔徑再次定義為NA，是顯微鏡物鏡可收集光線的程度的量度。高NA物鏡允許傾斜角度的光通過(guò)，而低NA物鏡則需要更多的直接光。給定光的波長(zhǎng)，可以從數(shù)值孔徑計(jì)算出物鏡的分辨率。
光源，視場(chǎng)光闌，光圈和聚光鏡均負(fù)責(zé)產(chǎn)生光并將其傳輸?shù)綐悠贰?/p>
光源通常是可調(diào)節(jié)以控制光強(qiáng)度的低壓鹵素?zé)襞荨?/p>
然后，光線穿過(guò)各種濾光片并進(jìn)入視場(chǎng)光闌，該視場(chǎng)光闌控制要照亮的樣本區(qū)域。
接下來(lái)是聚光鏡，它將明亮的光線聚焦在樣品上，樣品周?chē)恼彰麇F由聚光鏡控制，必須根據(jù)所使用的物鏡進(jìn)行調(diào)整。
操作光學(xué)顯微鏡
要開(kāi)始使用光學(xué)顯微鏡，請(qǐng)將包含感興趣區(qū)域的樣品放在顯微鏡載物臺(tái)上，將其直接放在物鏡上居中，然后使用載物臺(tái)夾將其固定到位。
接下來(lái)，打開(kāi)光源并切換到zui低功率的物鏡。
接下來(lái)，通過(guò)使用粗調(diào)旋鈕的初始調(diào)整將低倍物鏡在z方向上移動(dòng)來(lái)聚焦，然后旋轉(zhuǎn)微調(diào)旋鈕以使物體清晰聚焦。注意不要用物鏡撞擊幻燈片或載物臺(tái)，因?yàn)檫@可能會(huì)損壞鏡頭。
然后，一邊調(diào)節(jié)旋鈕一邊在x和y方向上移動(dòng)滑塊，一邊通過(guò)目鏡觀察來(lái)找到感興趣的區(qū)域。當(dāng)您從低倍放大到高倍放大時(shí)，視野的大小將急劇減小。
在移至較高功率之前，將zui低功率的物鏡放在感興趣的區(qū)域上會(huì)大大增加找到所需標(biāo)本的機(jī)會(huì)。
一旦樣品被置于低功率并聚焦，就移至將用于采集圖像的更高功率的物鏡。
shou先調(diào)整視場(chǎng)光闌，使光闌本身位于視場(chǎng)之外，從而優(yōu)化照明質(zhì)量。
接下來(lái)，調(diào)節(jié)聚光鏡的光闌，使其設(shè)置與所使用物鏡的數(shù)值孔徑相匹配。
zui后，再次調(diào)整焦點(diǎn)。這次僅使用微調(diào)旋鈕。
現(xiàn)在，您可以為標(biāo)本拍照了。
應(yīng)用
光學(xué)顯微鏡具有可視化各種標(biāo)本的潛力，并且復(fù)合顯微鏡的各種配置適用于許多不同的應(yīng)用。
在這里，您會(huì)看到研究人員準(zhǔn)備在手術(shù)顯微鏡下工作。這些顯微鏡通常懸掛在可移動(dòng)的臂上并且是立體的，這意味著它們?cè)试S光傳遞給觀察者以及安裝在顯微鏡上的照相機(jī)。該手術(shù)顯微鏡正用于小鼠的腎臟移植手術(shù)。
在此剪輯中，您將看到研究人員通過(guò)解剖顯微鏡觀察，同時(shí)挑選出理想的果蠅幼蟲(chóng)進(jìn)行進(jìn)一步解剖，以暴露體壁肌肉，從而可以研究神經(jīng)肌肉接頭。
在這里，您可以看到倒置復(fù)合顯微鏡，該顯微鏡的物鏡在鏡臺(tái)下方，正在準(zhǔn)備進(jìn)行顯微注射技術(shù)。該過(guò)程稱(chēng)為體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，是產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和產(chǎn)生克隆的重要方法。
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